T細胞激活試劑盒是用于體外活化及擴增人T細胞的工具,主要通過模擬體內(nèi)抗原呈遞細胞的作用,提供T細胞活化所需的信號,從而促進其增殖和功能活化。
試劑盒作用原理
T細胞在體內(nèi)通過與抗原呈遞細胞(APC)相互作用而活化,這一過程需要兩個關鍵信號:
第一信號:T細胞受體(TCR)識別APC表面MHC分子呈遞的抗原肽,導致CD3受體胞質(zhì)尾區(qū)ITAM中的酪氨酸磷酸化。
第二信號(共刺激信號):共刺激受體(如CD28)與APC表面的配體結(jié)合,防止T細胞無反應化。
T細胞激活試劑盒通過提供抗CD3和抗CD28抗體,模擬這兩個信號,從而在體外高效活化T細胞。
T細胞激活試劑盒使用注意事項
樣本準備:
外周血單個核細胞(PBMC)或純化 T 細胞需新鮮分離(使用密度梯度離心,避免反復凍融),活細胞比例需 > 90%(臺盼藍染色檢測)。
細胞懸液濃度需調(diào)整至說明書要求(通常 1×10? cells/mL),避免濃度過高導致營養(yǎng)不足或接觸抑制。
操作控制:
嚴格按說明書控制激活時間(如 24-72 小時,根據(jù)檢測指標調(diào)整:在激活后 4-6 小時表達,在 24 小時后升高)。
激活體系中避免混入血清中的抑制因子(如選擇低內(nèi)毒素胎牛血清),培養(yǎng)基需無菌(防止污染影響細胞活性)。
檢測方法選擇:
活化標志物:推薦流式細胞術(shù)(需注意抗體熒光素選擇,避免與激活試劑交叉反應)。
細胞因子:ELISA(檢測分泌到上清的細胞因子)或 intracellular staining(胞內(nèi)細胞因子染色,需用蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑如 Brefeldin A)。
增殖:CFSE 染色(追蹤細胞分裂代數(shù))或 ³H-TdR 摻入(靈敏度高,但需放射性安全防護)。
結(jié)果解讀:
需設置陰性對照(未激活 T 細胞)和陽性對照(如 PMA + 離子霉素激活組),確保激活體系有效。
不同供體的 T 細胞活化能力存在個體差異,建議同一實驗使用同一供體樣本,或增加樣本量減少誤差。